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原代培养及操作步骤

发布时间:2019-12-23 点击数:

原代分离细胞培养是指从供体内取出组织后,经机械及消化分离成单个细胞或单一型细胞群,使之在体外模拟机体的生理环境,在无菌、适当温度和一定营养条件下生存、生长和繁殖,能代表所来源组织细胞类型和表达组织的特异性特征。

原代细胞培养方法有:组织块培养法、消化培养法和悬浮细胞培养法。

1. 组织块培养法

1)取材,将组织剪成或切成1mm3大小的小块,并加入少许培养基使组织湿润。

2)将小块均匀涂布于瓶壁,每小块间距0.2 cm~0.5cm,一般在25mL培养瓶(底面积为17.5cm2)可接种20~30小块为宜,小块放置后,轻轻翻转培养瓶,使瓶底朝上,然后于瓶内加入适量培养基盖好瓶塞,将瓶倾斜放置在37℃温箱内。

3)培养2~4小时,待小块贴附后,将培养瓶缓慢翻转平放,静置培养,动作要轻,严禁摇动和来回振荡,以防由于冲动而使小块漂起而造成培养失败,若组织块不易贴壁可预先在瓶壁涂一薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。开始培养时培养基不宜多,以保持组织块湿润即可,培养24小时后再补液,培养初期移动和观察时要轻拿轻放,开始几天尽量不去搬动,以利贴壁和生长,培养3~5天时可换液,一方面补充营养,一方面去除代谢产物和漂浮小块所产生的毒性作用。

 

1. 组织块培养法流程

2. 消化培养法

该方法是采用前述的消化分散法,将妨碍细胞生长的细胞间质(包括基质、纤维等)去除,使细胞分散形成细胞悬液,然后分瓶培养。

 

2. 消化培养法流程

3. 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞,如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化,可采用低速离心分离,直接培养,或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

 

3. 细胞悬液制备流程

 

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