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细胞功能相关(凋亡、周期、增殖)

发布时间:2020-03-03 点击数:

细胞功能相关(凋亡、周期、增殖)


1、细胞凋亡实验

细胞凋亡又称程序性死亡,是机体主动的、高度有序地清楚无用细胞的过程

凋亡开始以后发生的第一个事件是细胞膜发生了外翻,位于膜内的磷脂酰丝氨酸(PS)翻转到了膜外侧,第二个事件是线粒体膜电位发生变化,细胞色素C释放,接下来Caspase通路被激活,最后的事件是DNA片段化,细胞形成凋亡小体,完成了整个凋亡过程


2、细胞周期实验

检测细胞周期最常用的方式就是检测细胞DNA含量,正常生长的细胞都会经历分裂过程,G0/G1期是两倍体时期,S期DNA开始合成,到G2/M期,细胞处于四倍体时期,之后细胞一分为二,进入下一个细胞周期。所用的试剂均为DNA染料或DNA探针。

实验步骤:

A、 收集并用PBS重悬细胞(每管约10^6cells),洗涤两次;

B、 使用1mLPBS重悬细胞于离心管内,并保持离心管在涡旋振荡仪维持细胞一直处于混匀的状态,然后一滴一滴的加入无水乙醇;

C、 4℃固定至少1小时,或者-20℃过夜;

D、 使用PBS洗涤两次,并加入500ulPI/RNase染色试剂,混匀室温避光孵育15min;

E、 上机检测

对于一般的PI检测,可以用-20度预冷的75%乙醇固定,使用PI/Rnase染色液染色。实验流程中固定过程十分关键。不同的细胞对固定的过程敏感度不一致,所以需要做预实验尝试。


3、细胞增殖实验

细胞增殖实验可以用细胞增殖染料CFSE或VPD450来检测,CFSE与FITC同一通道检测,VPD450与BV421同一通道检测。CFSE和VPD450染色原理类似,染色之后,细胞质会与染料结合,分裂一代之后胞浆内染料浓度减半,再次分裂,胞浆内染料浓度降低为原来的四分之一。随着分裂代数的增加,染料浓度逐渐降低。


4CBA液相多重蛋白检测实验

A、什么是高通量液相蛋白检测(CBA)技术?

CBA是利用一系列不同荧光强度得微球,同时分析样本中多种可溶性成份的流式检测方法。每个CBA微球都有特定的荧光强度,大小一致,包被有特异性抗体,提供了捕获表面,有效捕获待测蛋白,再加入荧光标记(PE)的检测抗体,形成“三明治”夹心复合物进行检测。(工作原理如下图)

B、CBA主要分为三大类。一、CBA Kit:二、CBA Flex Set:三、CBA功能微球(如若需求相应指标可与我们联系)

CBA Kit是一类完整试剂盒,里面包含实验所需的所有试剂,不需要单独购买其他试剂;(需要仪器满足具有APCPE荧光通道)

Cat.No

Description

Cytokines

561418

Human Anaphylatoxin Kit

C4a, C3a, C5a

552990

Human Chemokine Kit

IL-8, RANTES, MIG, MCP-1, IP-10

552932

Human Inflammation Kit

IL-8, IL-1b, IL-6, IL-10, TNF, IL-12p70

550749

Human Th1/Th2 Cytokine Kit

IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF, IFN-γ

551809

Human Th1/Th2 Cytokine II Kit

IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-γ

560484

Human Th1/Th2/Th17 Kit

IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-g,IL-17A

CBA Flex Set是一类自由组合的试剂,可以单独选取您感兴趣的指标,但是需要另外购买实验及上机所需的配套Buffer;(需要仪器满足APCAPC-Cy7PE通道)

Human

Mouse

Rat

Cytokines

Phos-signaling

Stem cell

IFN-γ, IL-1α,

IL-1β, IL-2…

IFN-γ, IL-1α, IL-4, IL-6…

IFN-γ,

IL-1α,

IL-1β,

IL-2…

p-Akt1,

p-JNK1/2…

Rex-1,

Oct-4, Nanog…

CBA功能微球是一类,提供单独的微球,上面不包被相应的抗体,需要客户自己包被使用,并搭配相应的实验上机所需及配套Buffer;

Functional bead

A4, A5, A6, A7, A8, A9, B4, B5, B6, B7, B8, B9, C4, C5…


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